小鼠诺如病毒MNV的qPCR检测方法

中国实验动物学会2017年5月发布的团标T/CALAS 22—2017 《实验动物 小鼠诺如病毒检测方法》描述了小鼠诺如病毒的检测方法。标准规定了小鼠诺如病毒(MNV)的检测方法、试剂等本标准适用于小鼠诺如病毒的检测。其中方法上包括ELISA、普通PCR、实时荧光定量PCR等方法。

小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )生物学特点

GB14922—2022 《实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测》中规定的免疫缺陷鼠中必须排除的病毒。小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus,  MNV ) 也是目前实验小鼠中感染率较高的一种病毒，有些实验动物设施的感染率非常高。MNV会激活免疫系统，影响抗体检测。小鼠诺如病毒是国标中免疫缺陷小鼠的必检项目。

小鼠诺如病毒属于杯状病毒科 诺如病毒属，与人源诺如病毒的生物学及遗传相似。2003年该病毒从小鼠中发现，后来受到越来越多的关注，关于诺如病毒感染的研究也逐步受到重视。鼠的MNV能通过接种细胞进行增殖，但是人类的诺如病毒不能通过细胞培养增殖。MNV基因组长约7.5kb，为正义单链RNA。

小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )感染后的影响

大部分实验小鼠对此病毒易感，虽然普通小鼠受感染无明显发病症状，但可出现短暂、轻度的生长迟缓。但是实验小鼠感染了MNV可能对实验结果产生一定影响或偏倚，轻则食欲，也可能影响繁殖，特别是免疫缺陷的小鼠感染后可能会导致小鼠死亡。而且可出现按持续性感染，持续数月，通过粪便排毒，引起大范围感染。

感染后可影响免疫能力，破坏免疫及代谢研究结果，通过影响基因表达等因素影响药效、毒理评估等。

小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )的检测方法

传统的病毒检测用 ELISA 的方法检测病毒抗体，但是由于 ELISA 的方法容易出现抗体交叉反应导致出现假阳性，并且对于免疫缺陷小鼠来说无法产生相应的抗体，所以需要有新的检测方法来完成病毒的检测。并且核酸病毒的增殖比抗体出现的时间更早，更易于早发现、早处理。

翼和生物开发了小鼠诺如病毒的qPCR荧光定量检测试剂盒，该试剂盒中HEX通道可鉴定样本是否感染了小鼠诺如病毒MNV。检测流程：一般采集粪便或者其他样本，用翼和DNA/RNA共提取试剂盒提取诺如病毒RNA，提取好的核酸直接取样5微升进行上样检测。PCR检测过程中需要设置阴性对照NTC和阳性MNV对照，确保检测的流程没有出现假阳性和假阴性。因为翼和的提取试剂盒中含有内参质控品（外源基因组），可以质控整个提取过程，所以在最终的检测数据中CY5通道可以看到扩增曲线。

该试剂盒灵敏度高，特异性强，成本降低，操作简单。